Pagiging Sa Schizophyllum Commune: Lumikha ng isang Sterile Culture Mula sa Mga Natagpuan na Mushroom: 3 Hakbang (na may Mga Larawan)

2024 May -akda: John Day | [email protected]. Huling binago: 2024-01-30 13:14

Ang itinuturo na ito ay nakatuon sa pagpapaliwanag kung paano lumikha ng isang walang buhay na kultura ng kabute na Schizophyllum Commune (karaniwang pangalan na Split Gill na kabute) sa isang petri dish gamit ang mga nahanap na kabute. Ang Schizophyllum Commune ay natagpuan na mayroong higit sa 28, 000 kasarian, matatagpuan sa lahat ng mga kontinente maliban sa Antarctica, at may kakayahang (tulad ng iba pang "puti at kayumanggi mabulok na fungi") upang mapahamak ang endocrine na nakakagambala sa polusyon (plastik, hormon na gumagaya sa mga petrochemical na pang-industriya tulad ng ang pataba na Atrazine, ang plasticizer Bisphenol-A, o ang synthetic hormone na Diethylstilbestrol).

Dadalhin ko ang mga diskarte sa pagtukoy ng ligaw na kabute, kung paano gumawa ng isang nutrient agar petri na ulam, at kung paano gamitin ang iyong nahanap na mga kabute upang mapalago ang isang sterile na nakahiwalay na kultura sa iyong petri dish. Ang iba pang mga itinuturo sa seryeng ito ay napupunta sa mga diskarte tulad ng pagkakakilanlan ng genetiko ng mga kabute, simpleng mga pagsusulit sa enzymatic upang masubukan ang kakayahang basura ang pagkasira ng mga plastik at paggaya ng hormon na polusyon, at kung paano gumawa ng keso sa S. Commune.

Ang proyektong ito ay nagmula sa pakikipagtulungan na trabaho ni Mary Maggic, Paula Pin, at ako mismo sa panahon ng isang paninirahan sa HANGAR sa Barcelona Spain pagkahulog Setyembre 2018. Para sa karagdagang impormasyon tungkol sa proyekto na basahin sa ~~ o laktawan ang lahat ng Bla Bla at dumiretso sa Hakbang 1 para sa tutorial:)

Ang mga imahe ay mula sa Schizophyllum Commune Fanzine ~ ang mga file ay maaaring ma-download nang libre dito

Sa panahon ng paninirahan ang aming tatlong pangunahing layunin ay:

1 ~ Magsaliksik at digest ang pang-agham panitikan sa Schizophyllum Commune at ito ay iba't ibang mga pakikipag-ugnayan sa mga hormone at endocrine na nakakagambala sa mga pollantant na petrochemical. Ang S. Commune ay isa sa maraming "puti at kayumanggi mabulok" na fungi na may kakayahang masira ang hormonal at endocrine na nakakagambala sa polusyon. Ang mga fungi na ito ay kumakain ng mga puno sa pamamagitan ng paglabas ng mga "lignocellulosic" na mga enzyme mula sa kanilang mga naka-network na katawan o "mycelia" at ang mga enzyme ay nagawang masira ang cellulose at lignin na gawa sa mga puno. Dahil sa pagkakapareho ng istruktura sa pagitan ng cellulose, lignin, at EDS '/ Hormones tulad ng Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol, at Nonylphenols, ang mga "lignocellulosic" na mga enzyme na itinago ng fungi ay maaari ring masira ang iba't ibang mga nakakalason. Bilang karagdagan dito, gumagawa ang S. Commune ng immunostimulate polysaccharides na kapaki-pakinabang bilang mga pag-iwas at paggamot sa cancer (Naaprubahan sa Japan para sa paggamot ng mga cancer sa cervix), maaaring mapahusay ang mga katangiang phytoestrogenic ng ilang mga halaman sa pamamagitan ng pagbuburo, maaaring magamit kapalit ng rennet at lactobacilius sa proseso ng cheesemaking, at gumawa ng thrombin clot na natutunaw na mga enzyme (kapaki-pakinabang sa paggamot sa thrombosis). Kakaibang, ang parehong "beta-glucans" na maaaring makuha sa tubig na kumukulo bilang paggamot sa kanser at mga imunostimulant, ay ginagamit din ng industriya ng petrolyo upang mapahusay ang mga ani ng langis, tinali ang S. Commune sa isang bizaar feedback loop sa paggawa ng endocrine disrupting petrochemicals na ito ay nakakapagpahamak at makapagpapagaling.

2 ~ Bumuo ng mga DIY at DIWO (gawin ito sa iba pa) na mga protokol na pinapasimple ang mga tatanggap na ito para sa pagtatrabaho sa EDC at fungi upang isalin ang naka-codified na pang-agham na kaalaman sa isang wika na mas madaling ma-access. Gamitin ang mga tatanggap na ito para sa edukasyon, para sa pagtatanong, para sa paglaban sa mga kolonyal na molekular, at paglikha ng mga bagong salaysay tungkol sa mga pagiging maraming multispecies at sa aming sama-samang mutagenesis.

3 ~ Hamunin ang nangingibabaw na cisheteronormative, queerphobic diskurso na pumapalibot sa endocrine na nakakagambala sa mga kemikal (EDC's). Upang mai-quote ang iskolar ng Malin Ah-King at Eva Hayward tungkol sa mga isyu, "Maraming mga news outlet ang nag-uulat ng mga nakakatakot na kwentong endocrine na ito mula sa aming mga bakuran. Sa pagsusumikap na harapin ang mga isyung ito-tulad ng ilalarawan namin sa sumusunod na media ay nag-ilaw ang isang Frankenstein metamorphosis na nagbabanta sa kasarian at sekswalidad. Sa halip na tugunan ang maraming iba pang mga panganib sa kalusugan na nauugnay sa nakakalason na pagkakalantad, ang pinaka-kahindik-hindik at polemikal na mga isyu ay tumayo para sa debate at kritikal na tugon. Nagtataas ito ng mga katanungan: Bakit ang sentro ng sex kaysa sa cancer, auto-immune disease, at maging ang kamatayan? Anong mga nerbiyos sa kultura (marami sa mga ito ay na-globalize), na na-trigger? At, para sa atin na may pag-aalala na pambabae, paano natin muling binabago ang debate na malayo sa esensya, pagiging sexismo, at heteronormatibidad? " (Mga Nakakalason na Kasarian).

Ang Schizophyllum Commune ay isang natatanging "puting mabulok na fungi" na napag-alaman na mayroong higit sa 28, 000 mga kasarian sa genetiko. Ang pagbagay na ito, maraming teorya, ay pinagana ang hindi kapani-paniwala na pagkakaiba-iba ng genetiko ng species na ito na umiiral sa bawat kontinente sa buong mundo maliban sa Antarctica. Nais naming ipagdiwang ang magandang sekswal na multiplicity ng organismong ito bilang isang halimbawa ng pagkahilo ng biology. Ang nangingibabaw na diskurso na nakapalibot sa EDC's sa media, at kahit na mula sa mga aktibista sa kapaligiran ay nakatuon nang pansin sa mga salaysay na hindi pang-agham, na ang mga molekulang ito ay nagdudulot ng ilang mga sekswalidad o kasarian na patolohiko ng ating lipunan, mga label na hindi pangkaraniwan, at madalas na naghahangad na alisin o iwasan. Hindi lamang ang panic-panic, queer phobic focus ng publiko na pag-iyak tungkol sa EDC na siyentipikong hindi makatotohanang (ang mga hormon at endocrine disruptor ay hindi pinapagana ng mga tao o trans) ngunit hindi nito pinapansin ang lahat ng mga nagwawasak na tunay na epekto na maaari nating maiugnay sa EDC's: labis na timbang, mga karamdaman sa teroydeo, ilang mga kanser, bukod sa iba pang mga panganib sa kalusugan.

Hakbang 1: Hanapin ang Pamumuhay ng Schizophyllum Commune na Nakatira sa Iyong Komunidad

Ang mga grade sterile na kultura ng lab ng Schizophyllum Commune ay maaaring mabili ng humigit-kumulang na $ 350 mula sa isang microbiological culture bank tulad ng ATCC… na kung saan ay pinili namin ang kultura mula sa mga ligaw na kabute nang libre:)

Napakadali ko dahil nababasa ko ang tungkol sa Schizophyllum Commune at napansin ko lamang na tumutubo ito sa isang puno sa harap ng aking apartment isang araw. Kung hindi ka napalad na aksidenteng madapa sa S. Commune sa iyong kapitbahayan, gugustuhin mong pumunta sa isang kakahuyan na lugar upang maghanap para sa mga "bracket" na mga kabute na tumutubo sa mga puno ng puno ng sakit na kahoy (mga puno na mukhang hindi nila ginagawa masyadong mahusay) o nahulog na mga puno. Ang S. Commune ay isa sa mga pinakakaraniwang umiiral na fungi sa buong mundo at matatagpuan sa karaniwang lugar saanman mayroong hardwood na tumutubo.

Nagbibigay ang Mushroomobserver.org ng isang mahusay na detalyadong paglalarawan kung saan at kailan ka malamang makahanap ng S. Commune, pati na rin kung paano ito makikilala at kung paano maiiwasan ang "magkamukha" na maaaring humantong sa maling pagkakakilanlan:

"IDENTIFICATION: Ang Schizophyllum commune ay madaling makilala sa pamamagitan ng mga split gills, siksik na buhok, at hugis-fan na cap. Ang cap ay 1-4.5cm ang lapad at karaniwang isang shell o fan form na may kulay-abo na maputi-puti na ibabaw. Ang Basidiospores ay 5-7.5 × 2 -3 micrometers. Ang isang katulad na kabute na kilala bilang "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa ay hindi gaanong ibinahagi.

HABITAT: Ang Schizophyllum commune ay lumalaki sa matitigas na kahoy na gumagamit ng mga enzyme upang mapahamak ang lignin at maging sanhi ng "puting mabulok." Kaya't ito ay matatagpuan sa karamihan ng anumang mga makahoy na lugar. Maaari itong matagpuan sa buong taon dahil sa kakayahang matuyo, mag-rehydrate sa mas mahusay na mga kondisyon, at pagkatapos ay magpatuloy sa sporulate.

Ang fungus na ito ay maaaring maging parasitiko sa maliliit na mga puno ng diameter na nasa ilalim ng stress mula sa iba pang mga kadahilanan, tulad ng pagkauhaw.

TINGNAN ANG ALIKES: Ang Plicaturopsis crispa o ang "Crimped Gill" ay katulad ng Split Gill. Mayroon din itong shell / fan shaped fruiting body. Gayunpaman ang takip ay isang mapula-pula kayumanggi o dilaw na kayumanggi, at sa ilalim ay napaka-natatanging. Ito ay may crimped na ugat tulad ng mga hasang na ibang-iba kaysa sa mga split gills ng Schizophyllum commune. Ang Crimped Gill ay hindi gaanong karaniwan ngunit natatangi kapag natagpuan."

Hakbang 2: Gumawa ng Nutrient Agar Plates para sa S. Commune upang Lumago

Upang ihiwalay ang isang kultura ng S. Commune nahanap ka kakailanganin mo ang ilang mga pinggan ng petri na puno ng pagkain para sa kabute. Ang Malt extract na Agar ay isang simpleng gumawa ng pagkain para sa S. Commune, o "nutrient media" na maaaring gawin nang madaling ma-access ang mga sangkap. Ito rin ay isang mahusay na mapagkukunan ng pagkain upang magamit kapag gumagawa ng mga eksperimento sa pagsubok ng enzymatic kasama ang S. Commune at iba pang puti o kayumanggi mabulok na fungi ~~ ang prosesong ito ay sasakupin sa isa pang itinuturo.

TANDAANG TANDAAN: Kung nagkakaproblema ka sa paghanap ng S. Commune, maraming iba pang mga fungi sa parehong pamilya na maaaring maging kultura gamit ang parehong mga proseso at kasing ganda kung hindi mas mahusay na mapahamak ang endocrine na nakakagambala sa mga pollutant. Ang Turkey Tail (Trametes Versicolor) ay natagpuan sa maraming mga pag-aaral na tiningnan ang daan-daang puti at kayumanggi mabulok na fungi upang maging pinakamataas na tagagawa ng "lignocellulosic" na mga enzyme na nagpapasama sa polusyon ng petrochemical. Ang mga kabute ng talaba ay napakahusay din dito.

Ginagawa ko ang aking gawaing microbiological sa isang lab ng biology ng komunidad na tinatawag na BUGSS (Baltimore Underground Science Space) kung saan may access ako sa mga gamit sa baso, mga digital na kaliskis, nagtapos na mga silindro, isang autoclave (para sa init at presyur na isterilisasyon ng media), atbp. sumikat sa buong mundo sa nakaraang dekada, kaya baka gusto mong suriin ang listahang ito upang makita kung mayroong malapit sa iyo. Kung wala kang isang mahusay na lab sa pamayanan tulad nito sa iyong lugar, kakailanganin mong mamuhunan sa ilang pangunahing kagamitan para sa prosesong ito tulad ng:

1 ~ Isang digital na sukatan para sa pagsukat ng tumpak sa iyong mga sangkap

2 ~ Isang pressure cooker upang isteriliser ang iyong media sa init at singaw

3 ~ Mga pinggan ng Petri, mabibili sa online ng murang mura, ang baso magagamit muli o hindi kinakailangan na plastik ay gagana ngunit ang muling magagamit ay laging mas mahusay:)

4 ~ Ilang baso para sa paghahalo ng iyong mga sangkap, isteriliser sa, at pag-iimbak.

Kung hindi mo nais na mamuhunan sa kagamitang iyon maaari kang makahanap ng pre-pour malt extract agar plate upang bumili sa mga website tulad ng Amazon ~ magiging mas mahal ito sa pangmatagalan kung plano mong magpatuloy na gumawa ng gawaing microbiological.

Marami nang magagaling na mga gabay at video sa youtube kung paano gumawa ng iyong sariling mga pagkaing nutrisyon ng media petri sa bahay. Kaya sa halip na magdagdag ng detalyadong detalye tungkol dito, mag-uugnay lamang ako sa isang pares - at ibibigay ang resipe para sa 2% Malt Extract Agar, na kung saan ay iyong ginagamit na nutrient media.

Mga Freshcap Musroom: Gabay sa Paano Gumawa ng Mga Agar Plate para sa Lumalagong Mga Mushroom sa Bahay

Mykoweb: Pagsisimula sa Paglilinang ng Mushroom

Malt Extract Agar Teknikal na Data Sheet

2% Malt Extract Agar (MEA) ~~ Recipe para sa 1 Litre:

20g Malt Extract (karaniwang supply ng paggawa ng serbesa, maaaring mabili sa online)

15g Agar (solidifying agent - ginagamit ito upang lutuin nang madalas upang mabili ito ng online o sa ilang mga grocery store)

1 Litre H20 (Karaniwan akong gumagamit ng Reverse Osmosis na tubig na maaaring mabili sa karamihan sa mga grocery store sa galon na mga baso)

Ang resipe na ito ay madaling mabago kung nais mong gumawa ng mas maliit na dami. Madalas akong gumagawa lamang ng 250 ML sa isang pagkakataon halimbawa, kaya't nagtatapos lamang ako gamit ang 5 gramo ng Malt Extract, 3.75 gramo ng Agar, at 250 ML ng tubig.

Hakbang 3: Magsisi sa Iyong Petri Dish Sa Mga Fungi

Ang kabute na nakikita mo ay tinawag na "fruiting body" ito ay isang maliit na bahagi lamang ng organismo. Ang karamihan ng katawan nito ay nakatago sa puno (o sa lupa), kinakain ang kahoy. Ang bahaging ito ng kabute ay tinatawag na mycelium. Upang kultura ang puting filamentous, tentacular, rhizomatic, mycelial na katawan ng Schizophyllum Commune sa isang petri dish, kukuha ka ng isang sample ng tangkay, isteriliser, at ilagay sa iyong mga plate ng MEA. Ang mycelium ay lalago mula sa isterilisadong sample ng kabute na kabute at kolonisahin ang petri dish, na mukhang isang puting banig na cottony.

Kakailanganin mo:

• Ang mga plate ng Malt Extract Agar (MEA) na iyong inihanda sa nakaraang hakbang
• 70% Isopropyl alkohol (rubbing alkohol) at isang spray na bote
• Papel na tuwalya
• Scalpel, o isang stainless steel razor - gagana lamang ang pamutol ng kahon
• mga metal tweezer
• guwantes
• Isang apoy - Gumagamit ako ng isang alcohaul lamp para sa isterilisasyon ng mga instrumento, ang NonDisjunction ay may mahusay na tutorial sa kung paano gumawa ng isa rito.
• Sterile ibabaw upang i-cut (Gumamit lang ako ng isang sterile petri dish para dito)
• Ang Parafilm, isang paraffin film na ginamit upang selyohan ang mga pinggan ng petri - maaari mo ring gamitin ang masking tape kung wala ka nito

STERILE TECHNIQUE:

Ang pangunahing bagay na nais mong tandaan kapag sinusubukan na gumamit ng isterilisadong pamamaraan ay ang bakterya at spores ay patuloy na nahuhulog sa hangin, kaya nais mong panatilihing sakop ang iyong mga pinggan sa petri hangga't maaari. Kapag binuhat mo ang mga takip upang ibuhos ang media, o mag-inokulate, palaging pinakamahusay na hawakan ang takip sa itaas lamang ng pinggan, pinapayagan kang ma-access ang loob nang pahalang, ngunit pinapanatili ang takip sa itaas ng pinggan upang maiwasan ang pagkahulog ng bakterya. Pangalawa, ikaw ay isang higanteng kalipunan ng tao, bakterya, fungal, at iba pang mga organismo ~~ bagaman hindi mo ito nakikita, napapaligiran ka ng isang siksik na ulap ng mga microbes na nagkakalat sa iyong katawan. Sa halip na nakaupo lamang sa ibabaw ng iyong balat, ang iyong micro-biome ay umaabot sa hangin ~~ sooooooo, huwag kailanman igalaw ang iyong mga kamay sa petri dish, o sandalan sa bukas na ulam upang tingnan. At magsuot ng guwantes kung mayroon ka sa kanila;)

I-SET up ANG IYONG SEMI-STERILE WORK SPACE

Pumili ng isang hindi maliliit na ibabaw ng trabaho na malinaw sa mga labi at basura. Pagwilig ng lugar sa iyong 70% solusyon sa Isopropyl Alkohol at punasan ito gamit ang isang tuwalya ng papel. Ilagay ang iyong apoy sa gitna ng iyong lugar ng trabaho at i-ilaw ito. Gugustuhin mong gumana nang malapit sa apoy hangga't maaari dahil lumilikha ito ng isang maliit na sterile na patlang sa paligid nito. Ilagay ang iyong mga plate ng MEA sa isang tabi at ang iyong sample ng kabute sa isang sterile na ibabaw ng paggupit sa kabilang panig. Karaniwan akong gumagamit ng isang sterile petri dish bilang aking sterile cutting ibabaw pati na rin isang tool rest. Ibuhos ang ilang Isopropyl Alkohol sa isang maliit na baso - gagamitin mo ito upang ma-isteriliser ang iyong talim at sipit habang nagtatrabaho.

* ¡~ INOCULATE ~! *

Bago gumawa ng anumang bagay, isteriliser ang iyong talim at sipit sa pamamagitan ng paglubog sa kanila sa isopropyl alch at pagkatapos ay hawakan sila ng kaunti sa apoy. Pagkatapos ng isterilisasyon, ipahinga ang mga ito sa iyong sterile na ibabaw ng paggupit kung itinakda mo ang mga ito. Gamit ang sipit, hawakan pa rin ang stem ng kabute at gupitin ang isang tipak sa dulo nito. Kunin ang tipak na ito at gupitin ang lahat ng mga gilid upang magtapos ka sa isang maliit na kubo ng kabute ng core ng kabute na tinanggal ang lahat ng mga panlabas na ibabaw. Nakakatulong ito na mapupuksa ang lahat ng iba pang mga microbes na nakatira sa kabute upang hindi nila mahawahan ang iyong kultura. Pagkatapos isawsaw ang core core sa isopropyl ng halos 30 segundo, hilahin, at hayaang matuyo sa loob ng isterilisong patlang ng apoy (huwag gamitin ang apoy upang matuyo ito, papatayin nito ang kabute). Muling isteriliserahin ng apoy ang iyong mga sipit habang hinihintay mo matuyo ang stem core. Pagkatapos ay iangat lamang ang takip ng isa sa iyong mga plate ng MEA sapat lamang upang i-slide ang mga sipit mula sa gilid, at gamitin ang isterilisadong sipit upang ilagay ang punong core sa gitna ng plato. I-seal ang plato gamit ang parafilm, at sa mga susunod na linggo, dapat mong makita ang S. Commune mycelium na kolonya ang plato.

Karaniwan akong gumagawa ng maraming mga plato kapag nagtatrabaho kasama ang mga ligaw na sample upang kung makakuha ako ng kontaminasyon, mas malamang na magkaroon ako ng kahit isang malinis na kultura.